Биохимия-практика

Kaчествена реакция за монозахариди.
Проба на Тромер:

Р-ята се изп. За доказване на глюкоза при изследване на биологични течности, хранителни пПроба на Тром
е
р: Р-ята
се изп. За доказване на глюкоза при изследване на биологични течности, хранителни продукти и др.
Принцип. Основава се на редукц
ионното де
йствие на глюкозата, по отнош
ени
е на медните йони, а именно: глюкозата редуцира куприхидроокиса [Cu(OH)2] в червено оц
ветен купроокис
(Cu2О), като се окислява до глюконова к
-на.
Р-ята протича при нагрява
не в ал
кална среда.
Начин на работа: в 1. епр.1 мл. р-р на глюкоза + 1 мл. NaOH(разбърква се добре) + 5к CuSO4 (меПр
инцип. Основава
с
е на ре
дукционното действие на глюкозата, по отношение на медните йони, а именно: глюкозата редуцира куприхидроокиса [Cu(OH)2] в червено оцветен купроокис (Cu2О), като се окислява до глюконова к-на. Р-ята протич
Епр.2.- 10к. раст. Масло. + 1мл ет
а
нол- разбърква с
е
- не добра разтворимост
Епр.3.- 10к. раст. Масло. + 1 мл етер- разбърква се- - малко по добра разтвор
и
мост
Епр
.4.- 10к. раст. Масло. + 1мл хлороформ- разбърква се- най-добра разтворимост
Епр.5.- 10к. раст. Масло. + 1мл ацетон- разбърква с
е- не добр
а разтвоЕпр.3.- 10к. раст. Ма
сло
. + 1 мл етер- разбърква се- - малко по добра разтворимост
Епр.4.- 10к. раст. Масло. +
1мл хлороформ-
разбърква се- най-добра разтворимост
Еп
р.5.-
10к. раст. Масло. + 1мл
ацетон-
разбърква се- не добра разтворимост
Доказване емулгирането на липидите.
Принцип. Под влиянието на разл. Детер
генти ( жлъчка,
б
еЕпр.4.
- 10к. раст. Масло. + 1мл хлороформ- разбърква се- най-добра разтворимост
Епр.5.- 10к. раст. Масло. + 1мл ацетон- разбърква се- не добра разтворимост
Доказване емулгирането на липидите.
Принцип. Под влиян
Принцип. Използва се хлороформен р-
р
на холестерол,
с
който се извършват двете характерни цветни р-ии за холестерол.
Реактиви. 1) оцетен анхидрид; 2) конц
е
нтр. Сяр
на к-на.
Мат за изследване: 1%ов хлороформен р-р на холестеростерол
Начин на работа:
Р-я на Салковски:
1 епр. 1мл хлороформен р
-р на хол.
- (бавно) 1мл конц. H2SO4 (вн
има
телно разбъркване- покой) – р-тат: черевено оцв на граничния слой и жълто- червено със
зеленикава флуо
ресценция на долния.
Реакция на ЛРеакт
иви.
1) оцетен анхидрид; 2) ко
нцентр.
Сярна к-на.
Мат за изследване: 1%ов хлороформен р-р на холестеростерол
Начин на работа:
Р-я на Салковски:
1
епр. 1мл хлорофо
р
мен р-р
на хол.- (бавно) 1мл конц. H2SO4 (вниматеМат за изследване: 1%ов хлороформен р-р на холестеростерол
Начин на работа:
Р-я на Салковски:
1 епр. 1мл хлороформен р-р на хол.- (бавно) 1мл конц. H2SO4 (внимат
1. 1мл р-р на аргинин + 5к а-нафтол

+ 4-5к. NaOBr +
1
к. карбамиден р-р = червено оцветяване
2. 1мл желатин + 5к а-нафтол + 4-5к. NaOBr + 1к. карбамиден р-р

= червен
о оцветяване
3. 1мл белтък + 5к а-нафтол + 4-5к. NaOBr + 1к. карбамиден р-р = червено оцветяване

Реакция на Адамкевич- Хопкинс
за триптоф
ан.
Принцип. В присъствие на
кон
ц.H2SO4 триптофанът се кондензир2. 1мл желатин + 5к а-нафтол + 4-5к. NaOBr + 1к. карба
миден р-р = черв
ено оцветяване
3. 1мл белтък + 5к а-наф
тол +
4-5к. NaOBr + 1к. карбам
иден р-
р = червено оцветяване

Реакция на Адамкевич- Хопкинс за триптофан.
Принцип. В присъствие на конц.H2SO4 трипто
фанът се конденз
и
ра с ал
дехид (глиоксалова к-на и др.) при което се получава черве3. 1мл белтък + 5к а-нафтол + 4-5к. NaOBr + 1к. карбамиден р-р = червено оцветяване

Реакция на Адамкевич- Хопкинс за триптофан.
Принцип. В присъс
2. 1 мл. хистидин + 10к. Na2CO3 + 1
м
л диазореактив –
р
азклаща се(15 мин при стайна t°)
3. 1 мл белтък + 10к. Na2CO3 + 1мл диазореактив –разклаща се(15 мин п
р
и стайна
t°)
Резултат : оранжево- червено оцветяване и в трите епр.

Цветни реакции за белтъци.
Нинхидринова реакция.
Принцип. Белтъците
, полипепт
идите и свободните а- аминоки
сел
ини реаг3. 1 мл белтък + 10к. Na2CO3 + 1мл диазореактив –разклаща се(15 мин при стайна
t°)
Резултат :
оранжево- червено оцветяване и в трите
епр.
Цветни реакции за белтъц
и.
Нинх
идринова реакция.
Принцип. Белтъците, полипептидите и свободните а- аминокиселини реагират с нинхидрин ( трике
тохидриденхидрат
)
при по
дходящи условия pH 3.8 – 7Резултат : оранжево- червено оцветяване и в трите епр.

Цветни реакции за белтъци.
Нинхидринова реакция.
Принцип. Белтъците, полипептидите и свободните а- аминокиселини реагират
Мат за изсл: 1% ов р-р на яйчен бел
т
ък
Начин на рабо
т
а: реакцията се извърява с биурет и разл. Белтъчни разтвори.
Получаване на биурет: няколко кристалчеН
а
чин на р
абота: реакцията се извърява с биурет и разл. Белтъчни разтвори.
Получаване на биурет: няколко кристалчета урея (карбамид) се п
оставят в
суха епроветка и се загряват
до
стопяване. Поради кондензиране на карбамида се отделя амоняк.
Към пробата с биурет и к
ъм др 2 проби –
с по 1 мл 1%ов белтъПолучаване на биуре
т: ня
колко кристалчета урея (к
арбамид
) се поставят в суха епроветка и се загряват до стопяване. Поради кондензиране на карбамида се отделя амоняк.
Към пробата с би
у
рет и к
ъм др 2 проби – с по 1 мл 1%ов белтъчен и желатинов р-р се прибавят по 1мл. NaOH и по 1к. CuSO4. епроветките се разклащат при което пробата с биурет дава розово-виолетово оцветяване. Тази с желатина черве
1мл белт р.р + 1к. Pb(CH3COO)2 = ут
а
йка
1мл белт р.р

+ 1к. р-р на CuSO4 = утайка
1мл белт р.р + 1к. р-р на ZnSO4 = утайка
1мл белт р.р + 1к. р-р на AgNO3 =

ут1мл бе
лт р.р + 1к. р-р на CuSO4 = утайка
1мл белт р.р + 1к. р-р на ZnSO4 = утайка
1мл белт р.р + 1к. р-р на AgNO3 = утайка
За доказван
е явлениет
о катионна пептиза1мл белт р.
р +
1к. р-р на ZnSO4 = утайка
1мл белт р.р + 1к. р-р на AgNO3 = утайка
За доказване явлен
ието катионна пе
птизация във бс.епр.се добавя по 10 кап
ки от
р1мл белт р.р + 1к. р-р
на AgNO
3 = утайка
За доказване явлението катионна пептизация във бс.епр.се добавя по 10 капки от разтвора на съответн
ата тежкометална

сол. За
доказване явлението катионна пептизация във бс.епр.се добавя по 10 капки от разтвора на съответната тежкометална сол. Утайките от 1,2 и 3 еп се разтварят а в 4еп утайката остава непроменена.

Утаяване н
66.Обратими утаечни реакции за бел
т
ъци.
Изсолване н
а
белтъци
Принцип. Под действието на соли на алкални и алкалоземни метали [NaC1, Na2SO4, MgSO4,(NH4)2S
O
Изсолван
е на белтъци
Принцип. Под действието на соли на алкални и алкалоземни метПринцип. Под действието на соли на алкални и алкалозе
мни метали
[NaC1, Na2SO4, MgSO4,(NH4)2S
O4
и др.] белтъците се утаяват и биха могли да се отделят от водни разтвори. Този процес
се нарича изсолв
ане и се използва за фракциониране на б
елтъц
и. Добавянето на достатъч
но висо
ки концентрации на неутрални соли води до дехидратиране на белтъчните молекули и елиминиране на хидратационнат
а им обвибка. В/
у
‘’огле
далните,, белтъчни частици се адсорбират йоните на солите с противоположен заряд, в следствие на което белтъчните молекули стават електронеутрални, лесно се асоциират и утаяват. Този процес зависи от йонн
Реактиви: 1) 5% ов р-р на NaCl; 2)
d
H2O.
Мат за изсл
е
дване: тъкан от далак или тимусна жлеза
Начин на раб. : ситно надробена тъкан (около 1гр.) от далак ил
и
тимусМа
т за изследване: тъкан от далак или тимусна жлеза
Начин на раб. : ситно надробена тъкан (около 1гр.) от далак или тимусна жлеза
се хомоген
изира в порцеланов хаван с по
мощ
та на кварцов пясък или в тефлоновНачин на раб. : ситно надробена тъкан (около 1гр.) о
т далак или тиму
сна жлеза се хомогенизира в порцеланов
хаван
с помощта на кварцов пяс
ък или
в тефлонов хомогенизатор на Потер. Прибавя се 10 мл на натриев хлорид (NaCl) и хомогенизирането продължава още
5-10 мин до пол
у
чаванет
о на силно вискозен разтвор, който се прехвърля в центрофужна епроветка и се центруфогира 5 мин при 3000minˉ¹. okolo 2-3ml от вискозната надутаечна течност се поставя в бехерова чаша и се добавят 30-40 мл
8. Доказване влиянието на pH върху
е
нзимното действи
е
.
Влияние на pH на средата в/у активноста на слюнчената амилаза.
Принцип. Зависимостта между активност
а
на слюн
чената амилаза и pH на средата може да се установи, каВлияние на pH на средата в/у активноста на слюнчената амилаза.
Принцип. За
висимостта
между активноста на слюнчена
та
амилаза и pH на средата може да се установи, като се извърши опит при различна концент
рация на H+ (вод
ород) с използването на скорбялаПринцип
. Зав
исимостта между активност
а на сл
юнчената амилаза и pH на средата може да се установи, като се извърши опит при различна концентрация на H+ (во
дород) с използв
а
нето на
скорбяла в качеството на субстрат.
Реактиви: 1) 0,2М р-р на Na2HPO4 (36.62g и дH²O до l l); 2) 0.1 M р-р на лимонена киселина (19,212g лимонена киселина и дH²O до l l); 3) 1%ов р-р на скорбяла; 4) луго
0,376,010,5Чер6,010,5Черв10
,
50,5Червено-ка
Ч
ервено-кафявоIII0,690,316,410,5Червено-жълтоIVIIII0,690,310,690,316,410,0,316,41

,5Чер6,
410,5Черв10,50,5Червено-жъЧервено-жълтоIV0,770,236,810,5ЖълтоV0,870,IIV0,770,0,770,236,810,0,236,810
,5Жъл6,8
10,5Жълт10,50,5ЖълтоV
0Жъ
лтоV0,870,137,2VV0,870,870,137,210,0,137,210,5Чер7,210,5Черв
10,50,5Червено- жЧервено- жълто
VI0,940,067,6
10,5Червено-кафявоVIIVVI0,940,0,940,067,610,0,067,610,5Чер7,610,5Черв10,50,5Черве
н
о-каЧерв
ено-кафявоVII0,970,038,010,5Виолетово 
9.ВлиVVII0,970,030,970,038,010,0,038,010,5Вио8,010,5Виол10,50,
5Виолетов
о Виолетово 
9.Влияние на т
емп
ературата в/

99.Влияние на температурата в/у ензимната активност. Ензимни активатори
и инхибитори.
В
лияние на t° в/у активността на а-амила
зата
от различни биологични ас
пекти.
Принцип: ензимът а- амилаза катализира хидролизата на а- 1,4-гликозидните връзки в молекулата на скорбялата
и гликогена. Хид
р
олизния
т процес обхваща няколко етапа с образуванВлияние на t° в/у активността на а-амилазата от различни биологични аспекти.
Принцип: ензимът а- амилаза катализира хидролизата на а- 1,4-гликозидните връзки в
Мат за изследване: 1) слюнка, разре
д
ена с д.вода в с
ъ
отношение 1:10
Начин на работа: в 5 епр.се се отмерват по 0,5 мл р-р на скорбяла и съответния мат за и
з
следване
като във 2рата еп материалът за изследване е загряван предварително до кипене. Всички проби се поставят зНачин на работа: в 5 е
пр.се се о
тмерват по 0,5 мл р-р на скор
бял
а и съответния мат за изследване като във 2рата еп материалът за изследване е загряван
предварително д
о кипене. Всички проби се поставят за 1
0 мин
при различни температурн
и услов
ия: 1- вряща водна баня, 2 и 3- при t°- 37-40°С; 4-в лед; 5- стайна t°. След катго изтече определеното време
за инкубация, къ
м
епр.с
ВВлияние на